在后基因组时代有许多方法分析肿瘤,较为流行的是依赖于基因组学和蛋白组学。实际上,一个肿瘤是细胞基因组和其他的微环境持续相互作用的结果。 肿瘤细胞基因组会出现缺失,重排,甲基化,扩增和插入。在分子肿瘤学领域,可以应用肿瘤分子标记来检测肿瘤细胞出现的缺失,重排,甲基化,扩增和插入,从而对肿瘤早期诊断,预后和治疗方法的选择提供指示。
罗氏Lightcycler 480实时荧光定量PCR仪
罗氏核酸自动提取仪
美国ABI公司 9700型PCR扩增仪
莱卡荧光显微镜
Agilent 2100生物分析仪
Thermobrite原位杂交仪
Luminex多功能液相芯片分析仪
高分辨熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)技术是近年来国际上兴起的一种最新的SNP及突变研究工具。
HRM方法因其操作简便、快速,使用成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作而受到普遍的关注。由于其具有灵敏度高、特异性好、高通量、快速、检测成本低等优势,目前已广泛应用于流行病学等大规模的未知突变/SNP和已知突变的genotyping工作。这种检测方法不受突变碱基位点与类型局限,在进行针对已知位点的基因分型工作时,无需序列特异性探针,只需要合成低成本的非标记探针或者直接使用小片段扩增的方案,在PCR结束后直接运行高分辨熔解,即可完成对样品的分析。
荧光原位杂交(Fluorescence in situhybridization)技术是一门成熟的分子细胞遗传学技术,是在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术,其基本原 理是用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上 是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而可以用探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位,检测特异的DNA序列。
应用:
分子克隆技术 核酸提取和纯化
实时荧光定量PCR 相对定量(探针法)
相对定量(染料法) 染色体异常FISH检测